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Title: Étude de l’effet in vitro du peroxynitrite sur la viabilité de la larve hydatique d’Echinococcus granulosus
Authors: BOUTRA, Hafida
LOUNI, Rahma
Keywords: Echinicoccus granulosus, monoxyde d’azote, le peroxynitite.
Issue Date: 1-Jul-2018
Publisher: Université de Bouira
Citation: Université de Bouira
Abstract: L’hydatidose est une parasitose cosmopolite causée par la forme larvaire d’un cestode appelé Echinococcus granulosus. Elle est non seulement l’une des maladies parasitaires les plus dévastatrices chez l’homme, mais elle est également très difficile et couteuse à traiter et à prévenir. L’implication du NO dans l’action antihydatique a été démontrée dans plusieurs études in vitro et in vivo. Dans ce contexte. Notre travail a porté sur étude histopathologique qui a montré l’instauration d’un processus inflammatoire. D’autre part l’étude de l’effet in vitro du peroxynitrite synthétisée par la méthode du Quench flow. Nos résultats ont montré un effet dégénératif sur la membrane laminaire traduit par un brunissement progressif dépendant de la concentration en peroxynitrite. L’étude histologique a montré des effets cytotoxiques du peroxynitrite vis-à-vis du tissu pulmonaire à une concentration de 40 μM. Ces données pourrait contribuer au développement de nouveaux agents scolicides efficaces qui pourraient être utilisé dans les technique thérapeutique nécessitant l’utilisation d’agent scolicide.
Description: Sommaire Remerciement Dédicaces Liste des abréviations Liste des figures Liste des tableaux Introduction………………………………………………………………………………….01 Revue bibliographique Chapitre I : L’échinococcose kystique I.1. Définition…………………………………………………………………………………03 I.2. La classification d’E. granulosus…………..…………………………………………….03 I.3. Les souches d’Echinococcus granulosus……….………………………………………...03 I.3.1. La souche G1 Chien-Mouton……………………………………………………….…..04 I.3.2. La souche G4 chien-cheval………………………………………………………….….04 I.3.3. La souche G5 chien-boeuf………………………………………………………………04 I.3.4. La souche G6 chien-dromadaire………………………………………………….……04 I.3.5. La souche G7 chien-porc et inclus la variante G9……………………………………….…04 I.3.6. La souche G8 chien-cervidés, chien-homme…………………………………………05 I.3.7. La souche G10………………………………………………………………………..05 I.3.8. La souche lion…………………………………………………………………………05 I.4. Description morphologique d’Echinococcus granulosus……………………………….05 I.4.1. la forme adulte………………………………………………………………………….05 I.4.2. l’oeuf………………………………………………………………………………….…06 I.4.3. la larve ou hydatide………………………………………………………………….…07 I.5. La morphologie des kystes……………………………………………………….………07 I.5.1. L’adventice…………………………………………………………………….……….07 I.5.2. La cuticule………………………………………………………………………..…….07 I.5.3. La membrane proligère…………………………………………………………..……07 I.6. Le cycle de parasite………………………………………………………………………08 I.7. Les caractéristiques cliniques de l’hydatidose……………………………………………09 I.7.1. Les symptômes de l’hydatidose…………………………………………………..…….09 I.7.2. Les localisations du kyste hydatique……………………………………………………10 I.7.2.1. La localisation hépatique…………………………………………………………….10 I.7.2.2. La localisation pulmonaire…………………………………………………………..10 I.7.2.3. Les localisations rares………………………………………………………….….…10 I.8. Diagnostic de l’échinococcose kystique………………………………………………....10 I.9. Réponse immune de l’hôte………………………………………………………………11 I.10. Traitement de l’Echinococcose kystique……………………………………………….12 I.11. Prophylaxie…………………………………………………………………………….12 Chapitre II : Le monoxyde d’azote ………………………………………………………….13 II.1. Définition de monoxyde d’azote………………………………………………………13 II.2. Propriétés physicochimiques de monoxyde d’azote……………………………………13 II.3. La biosynthèse de NO…………………………………………………………………..14 II.4. Les isoformes de la NOS………………………………………………………….……15 II.5. Métabolisme et mécanisme d’action cellulaire de NO…………………………………16 I.6. les effets de NO………………………………………………………………………….17 II.7. NO et système immunitaire……………………………………………………..………18 II.8. La cytotoxicité du monoxyde d’azote…………………………………………….……18 Partie expérimentale Chapitre III : Matériel et méthode III.1. Matériel…………………………………………………………………………………19 III.1.1. Matériel biologique…………………………………………………….……..…...….19 III.1.1.1. Kystes hydatiques……………………………………………………….….……….19 III.1.1.2. Les biopsies………………………………………………………………….….…..19 III.1.1.3. Le milieu de culture…………………………………………………………………19 III.1.2. Matériel non biologique………………………………………………………..…….20 III.1.2.1. Appareillages et équipements………………………………………………………20 III.1.2.2. Accessoires et verreries…………………………………………………………….20 III.1.2.3. Réactifs………………………………………….……………………...………...…21 III.2. Méthode………………………………………………………………………….…….21 III.2.1. Synthèse du peroxynitrite par la méthode du «quench flow»……………………….21 III.2.2. Obtention des membranes kystiques d’Echinicoccus granulosus……………………24 III.2.3. La mise en culture des pièces de membrane…………………………………………24 III.2.4. Technique de préparation des coupes histologiques…………………………….……25 III.2.4.1. La fixation des pièces dans le formaldéhyde……………………………………….25 III.2.4.2. Déshydratation et éclaircissement…………………………………………...……..26 III.2.4.3. Inclusion en paraffine (enrobage)………………………………………………….27 III.2.4.4. La réalisation des coupes histologiques……………………………………………28 III.2.4.5. Etalement, collage et séchage…………………………………………………..….29 III.2.4.6. Déparaffinage et réhydratation…………………………………………………….30 III.2.4.7. Coloration et montage…………………………………………………………..…30 III.2.4.8. observation microscopique des coupes histologiques……………………………...33 Chapitre IV : Résultats et discussion IV.1. Résultats…………………………………………………………………………..……34 IV.1.1. Obtention de la solution du peroxynitrite……………………………….…...……….34 IV.1.1.1. Production du peroxynitrite de sodium (ONOONa)………………………..………34 IV.1.1.2. Etude de la réaction de nitration par le peroxynitrite…….…………………..34 IV.1.2. Examen macroscopique…………………………………………………………….…36 IV.1.3. Etude de l’effet in vitro du peroxynitrite sur les membranes du kyste hydatique…...36 IV.1.3.1. Effet sur la membrane germinative adhérente à la membrane laminaire……….….36 IV.1.4. Etude histologique………………………………………………………………...….37 IV.1.4.1. Tissu pulmonaire sain …………………………………………………………..….37 IV.1.4.2.Tissu pulmonaire affecté par la larve hydatique………………………………….…38 IV.1.4.3. Etude des effets cytotoxiques in vitro du peroxynitrite………………….…………39 VI.2. Discussion générale………………………………………………………………….…45 Conclusion……………………………………………………………………………………48 Références bibliographiques Annexes Résumé
URI: http://193.194.80.38:8080/jspui/handle/123456789/2994
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